亚搏手机版app下载技术流程

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  大家一起来学习一下亚搏手机版app下载的实验操作流程和技术细节。下面,大家首先来看一下亚搏手机版app下载的操作流程:

  亚搏手机版app下载流程

  细胞间接免疫荧光-IF(ICC)

  按合适的细胞密度接种细胞爬片

  1.弃去细胞培养液,PBS洗3次,5 min/次。

  2.固定:4%多聚甲醛室温固定20 min,也可4℃固定过夜。

  根据细胞室提供细胞的时间,若下午提供,那么当天不能完成实验,所以会在固定这步暂停,即4℃固定过夜;若上午提供细胞,当天可以完成全部实验,即室温固定20min。平时多数实验是室温固定20min。

  3.PBS洗3次,5 min/次。

  4.透膜:用含有0.3% Triton X -100的 PBS室温孵育20 min(如检测细胞膜外侧蛋白,可省略此步)。

  5.PBS洗3次,5 min/次。

  6.封闭:用PBS配制的5%~10%二抗来源相同种属正常血清室温封闭20 min。

  7.PBS洗3次,3 min/次。

  8.用Bioss标准抗体稀释液按合适比例稀释一抗,37℃下孵育2 h或4℃过夜(孵育抗体的浓度、孵育时间通过预实验确定)。

  9.PBST洗3次,10 min/次。

  10.用Bioss标准荧光抗体稀释液按合适比例稀释二抗,37℃下孵育1h (孵育抗体的浓度、孵育时间通过预实验确定) 。

  11.PBST洗3次,10 min/次。

  12.DAPI复染细胞核。

  13.PBS洗3次,5 min/次。

  14.取出细胞爬片置于载玻片上,镜下观察。

  冷冻组织切片间接免疫荧光(IF-F)

  1.制备好的冰冻切片放置于室温复温。

  2.PBS洗3次,5 min/次。

  3.封闭:用PBS配制的5%~10%二抗来源相同种属正常血清室温封闭20 min。

  4.PBS洗3次,3 min/次。

  5.用Bioss标准抗体稀释液按合适比例稀释一抗,37℃下孵育2 h或4℃过夜(孵育抗体的浓度、孵育时间通过预实验确定)。

  6.PBST洗3次,10 min/次。

  7.用Bioss标准荧光抗体稀释液按合适比例稀释二抗,37℃下孵育1h (孵育抗体的浓度、孵育时间通过预实验确定) 。

  8.PBST洗3次,10 min/次。

  9.DAPI复染细胞核。

  10.PBS洗3次,5 min/次。

  11.用防荧光淬灭封片剂封片,镜下观察。

  石蜡包埋组织切片间接免疫荧光( IF-P )

  1.制备好的石蜡切片按以下顺序进行脱腊水化

  二甲苯?:20min,二甲苯П:20min,二甲苯Ш:20min,无水乙醇:15min,95%乙醇:15min,70%乙醇:15min,50%乙醇:15min,蒸馏水?:5min,蒸馏水II:10min。

  2.PBS洗3次,5 min/次。

  3.抗原修复:0.01M枸橼酸修复液(依据抗原种类不同选择合适的抗原修复液与修复方式),沸水浴热修复15min。

  4.PBS洗3次,5 min/次。

  5.封闭:用PBS配制的5%~10%二抗来源相同种属正常血清室温封闭20 min。

  6.PBS洗3次,3 min/次。

  7.用Bioss标准抗体稀释液按合适比例稀释一抗,37℃下孵育2 h或4℃过夜(孵育抗体的浓度、孵育时间通过预实验确定)。

  8.PBST洗3次,10 min/次。

  9.用Bioss标准荧光抗体稀释液按合适比例稀释二抗,37℃下孵育1h (孵育抗体的浓度、孵育时间通过预实验确定) 。

  10.PBST洗3次,10 min/次。

  11.DAPI复染细胞核。

  12.PBS洗3次,5 min/次。

  13.用防荧光淬灭封片剂封片,镜下观察。

  直接免疫荧光

  1. 4%多聚甲醛室温固定样品20 min,也可4℃固定过夜。

  2.PBS洗3次,5 min/次。

  3.封闭:用PBS配制的5%~10%二抗来源相同种属正常血清室温封闭20 min。

  4.PBS洗3次,3 min/次。

  5.用Bioss标准荧光抗体稀释液按合适比例稀释一抗,37℃下孵育2h或4℃过夜(孵育抗体的浓度、孵育时间通过预实验确定)。

  6.PBST洗3次,10 min/次。

  7.DAPI复染细胞核。

  8.PBS洗3次,5 min/次。

  9.用防荧光淬灭封片剂封片,镜下观察。

  以上就是关于亚搏手机版app下载技术流程~供参考~

 

 

2021年2月25日 15:02
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